中国耳鼻咽喉头颈外科
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miR-193a-3p/E2F6调控细胞焦亡在鼻咽癌中的机制研究
刘丹, 万浪, 岑瑞祥, 徐芬, 喻辉
摘要
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24
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PDF
(1956KB)(
23
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可视化
目的 探讨miR-193a-3p/E2F6在鼻咽癌(NPC)中对细胞焦亡的调控作用及其潜在的分子机制。方法 双荧光素酶基因报告实验评估了miR-193a-3p对E2F6的靶向调控作用。HNE-2细胞分为不同处理组:对照组、空白质粒组、沉默E2F6质粒组、空白质粒(miRNA)组、过表达miR-193a-3p组、过表达miRNA+空白(E2F6)质粒组以及过表达miRNA+过表达(E2F6)质粒组。通过qPCR检测miR-193a-3p的表达水平,Western blot检测E2F6蛋白的表达以及NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路的激活情况。同时,使用扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察细胞形态,CCK-8法评估细胞增殖情况,进行集落形成实验和Transwell实验来检测细胞集落形成数量和迁移数量。结果 与对照组(0.90±0.02)和空白质粒组(0.88±0.02)相比,沉默E2F6质粒组中E2F6蛋白(0.26±0.02)的表达水平显著降低,NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路明显被激活,SEM显示细胞发生肿胀。CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均下降(P 均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实E2F6是miR-193a-3p的靶基因。同对照组(1.01±0.03,1.02±0.02)和空白质粒(miRNA)组(1.02±0.04,0.21±0.03)相比,过表达miR-193a-3p组(2.02±0.32,0.23±0.02)中的miR-193a-3p的表达水平升高,E2F6的表达水平显著降低。而NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N信号通路明显被激活,SEM显示细胞发生肿胀。CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均下降(P 均<0.05)。同过表达miR-193a-3p组和过表达miRNA+空白(E2F6)质粒组相比,发现过表达miR-193a-3p结合过表达E2F6组中E2F6蛋白的含量上升,NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N蛋白的含量下降,
SEM显示细胞肿胀减轻,CCK-8实验、集落形成实验和Transwell实验显示细胞活力、集落形成数量和迁移数量均上升(P 均<0.05)。结论 miR-193a-3p通过靶向抑制E2F6激活NLRP3/Caspase-1/GSDMD/GSDMD-N通路,诱导NPC细胞发生细胞焦亡,并抑制其增殖、克隆和侵袭。
2023, 30 (11): 686-.
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沉默长链非编码RNA HCG18通过miRNA-107/PAG1轴逆转喉癌细胞放射抗拒机制研究#br#
岑瑞祥, 刘丹, 万浪
摘要
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PDF
(736KB)(
594
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可视化
目的 分析长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)HCG18对放疗抗拒喉癌的放疗敏感性的影响及作用机制。方法 流式细胞术检测喉癌细胞系经过放射后的细胞凋亡率,应用荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测lncRNA HCG18、微小RNA-107(miR-107)和PAG1在喉癌细胞中的相对表达含量,分别于喉癌细胞中敲除和过表达HCG18、miR-107和PAG1,用克隆形成等检测其
对喉癌细胞放疗敏感性的影响。利用实时荧光qRT-PCR和蛋白质印迹法检测HCG18对miR-107及PAG1表达的影响,并运用荧光素酶报告实验分析HCG18/miR-107/PAG1之间的调控作用。结果 Tu212max细胞系细胞凋亡率低于Tu212和Tu212min细胞系,将其选定为放疗抗拒的喉癌细胞系。HCG18和PAG1在喉癌组织和Tu212max中表达上调,miR-107在喉癌组织和Tu212max中表达下调(t =22.60、18.15、14.38,P 均<0.05)。在Tu212max中沉默HCG18和PAG1的表达能够抑制Tu212max克隆(P 均<0.05)、提高
凋亡率(t =35.55、24.25、51.44、49.75,P 均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实HCG18可负向调控miR-107的表达(t =32.46,P <0.05),miR-107可以负向调控其下游靶基因PAG1的表达水平(t =34.71,P<0.05),HCG18通过调控miR-
107而并正向调控PAG1的表达水平。HCG18对Tu212max放射敏感性的影响又依赖于miR-10 7。结论 沉默HCG18表达,促进miR-107上调,而抑制PAG1的表达,最终提高了放疗抗拒喉癌细胞的放射敏感性。
2022, 29 (6): 358-.
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3-溴丙酮酸对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响及其机制研究
刘丹,徐芬,万浪,彭聪,喻辉
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王健艳,孟颖迪,刘丹青,赵明
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韩红蕾 李海霞 王娜亚 刘丹丹
摘要
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206
)
可视化
2013, 20 (4): 211-214.
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鼓室内注射地塞米松治疗2型糖尿病伴突发性聋
刘丹. 万浪 王桃姣 岑瑞祥
摘要
(
273
)
可视化
2013, 20 (3): 161-162.
Select
鼻内镜下动脉性鼻出血的综合治疗
罗克强 杨大章 王娜亚 刘丹丹
摘要
(
149
)
可视化
2007, 14 (5): 295-297.
Select
蝶窦和视神经管多层螺旋CT的测量
刘丽庭 仇沂洲 刘丹 王绍美
摘要
(
172
)
可视化
2007, 14 (3): 138-140.